染色體檢測

染色體核型分析是對整個基因組進行分析，包括染色體數(shù)目異常和結(jié)構(gòu)異常，在血液腫瘤的診斷、疾病危險度評估、預(yù)后分層、治療方案選擇和治療效果監(jiān)測、靶向治療以及是否需要進行骨髓移植的選擇等方面有重要臨床意義。

● 骨髓/外周血/腦脊液/胸腹水/淋巴組織(G顯帶)染色體核型分析[CA] 

CLL首選標本為外周血，需用兩種不同的方法進行培養(yǎng)和分析，收取兩份費用

● 先天性染色體異常核型分析[CB]

標本必須用外周血；診斷體質(zhì)性染色體改變，或遺傳性/先天性疾病的染色體異常。

● 染色體斷裂試驗[CC]

標本必須用外周血；用于范可尼貧血（先天性再障）的診斷和鑒別診斷。

熒光原位雜交(FISH)項目

FISH是從細胞水平檢測基因的異常，包括基因的丟失、擴增/增加、易位等，或細微的染色體結(jié)構(gòu)異常，染色體數(shù)目異常，以及識別mar染色體（染色體水平無法識別其結(jié)構(gòu)異常的染色體）。可檢測間期細胞，不受中期分裂象限制，也可檢測中期分裂象，尤其在檢測與預(yù)后密切相關(guān)且有眾多伙伴基因的基因方面具有明顯優(yōu)勢。

● 雙色探針[C1]

● 單色探針

● 骨髓涂片/病理石蠟包埋切片F(xiàn)ISH[C1A]

每一張涂片多做兩種不同的FISH探針檢測，按探針數(shù)收費。

● 間期細胞性別染色體FISH(X/Y)[C2A]

常用于供受者性別不同的移植時，移植后供受者細胞比例的動態(tài)監(jiān)測。

● 染色體全長探針（涂抹探針）FISH[C2C]

用于識別mar染色體或隱匿性易位

FISH多探針組合

● AML 4探針組合[C4A]

RUNX1-RUNX1T1；CBFB分離探針；PML-RARA；MLL分離探針

● AML 8探針組合[C4B]

RUNX1-RUNX1T1；CBFB分離探針；MLL分離探針；PML-RARA；GATA2,MECOM；TP53；DEK-NUP214；MLLT3-MLL

● MDS 5探針組合[C5A]

EGR1/D5S23；D7S486/CEP7；CEP8；D20S108；TP53

● MDS 8探針組合[C5B]

EGR1/D5S23；D7S486/CEP7；CEP8；D20S108；MLL；CEPY；GATA2,MECOM；TP53

● B-ALL 4探針組合[C6A]

BCR-ABL1；E2A分離探針；iAMP21；MLL分離探針

● B-ALL 10探針組合[C6B]

BCR-ABL1；CHIC2/D10Z1/D17Z1；E2A分離探針；ETV6-AML1；iAMP21；

IGH分離探針；MLL分離探針；MYC分離探針；NUP214-ABL1；P16/D9Z3

● B-ALL高危及靶向治療相關(guān)11探針組合[C6C]

BCR-ABL1；CRLF2；P2RY8；PDGFRB；E2A分離探針；ETV6-AML1；

iAMP21；MLL分離探針；NUP214-ABL1；JAK2分離探針；TP53

● BCR-ABL1樣5探針組合ALL[C7]

BCR-ABL1；IGH@-CRLF2；P2RY8-CRLF2；PDGFRB分離探針；JAK2分離探針

● T-ALL 4探針組合[C8]

NUP214-ABL1；TRA-D/C分離探針；TCF3分離探針；PDGFRB分離探針

● CLL 4探針組合[C9A]

ATM/CEP11；CEP12；D13S319；TP53

● CLL 8 探針組合 [C9B]

ATM/CEP11；CCND1-IGH；CEP12；D13S319；IGH-BCL2；IGH分離探針；MYB；TP53

● 多發(fā)性骨髓瘤(MM)5探針組合[C10]

CCND1-IGH；FGFR3-IGH；IGH-MAF；TP53；1q21擴增

● 淋巴瘤4探針組合[C11A]

IGH-BCL2；CCND1-IGH；IGH 分離探針；MYC 分離探針。組織印片/ 新鮮標本，不包括病理切片。

● DLBCL 4探針組合[C11B]

IGH-BCL2；BCL6分離探針；CCND1-IGH；MYC/CEP8-IGH三色探針。組織印片/新鮮標本，不包括病理切片。

● MCL4探針組合[C11C]

CCND1-IGH；CEP12；D13S319；TP53。組織印片/ 新鮮標本，不包括病理切片

● 神經(jīng)母細胞瘤2探針組合[C12]

MYCN；1p36微缺失

● 嗜酸相關(guān)基因3探針組合[C13]

FGFR1；PDGFRA；PDGFRB；

[可另行加做JAK2分離探針（2016版WHO:PCM1-JAK2融合基因也與嗜酸異常相關(guān)）]

● 自選4探針

FISH檢測相關(guān)基因臨床意義簡介

● RUNX1-RUNX1T1，t(8;21)(q22;q22)

見于約8%成人和12%兒童AML，不伴KIT突變者預(yù)后好，伴KIT、FLT3突變者用TKIs有效。

● CBFB分離探針，inv(16)(p13q22)

inv(16)(p13q22)形成CBFB-MYH11融合基因，通常見于伴嗜酸性粒細胞增高的AML，不伴KIT突變者預(yù)后好。

●PML-RARA，t(15;17)(q24;q21)

見于98%的AML-M3，是APL的主要診斷指標。

●DEK-NUP214，t(6;9)(p23;q34)

見于約1-2%的AML，通常預(yù)后較差。

●MLLT3-MLL，t(9;11)(p22;q23)

見于AML，尤其是在M5中多見，在所有累及MLL的異常中，預(yù)后相對較好，在AML中預(yù)后中等。

● MLL(KMT2A) 分離探針，t(v;11q23)/del(11q)

MLL基因易位見于各類型白血病，包括AML、ALL、MAL、t-AML等，總發(fā)生率約10%，在嬰兒B-ALL中發(fā)生率達85%，AML中常見于M4和M5，初發(fā)AML占3%、治療相關(guān)AML占10%，預(yù)后差。

目前已報道的MLL伙伴基因有近百種，PCR方法難以檢測少見的融合類型，而MLL分離探針可檢測各種MLL易位。

●D7S486/CEP7，-7/del(7q31)

-7/del(7q)發(fā)生于約15%的成人MDS，40%的兒童MDS，50%的治療相關(guān)

AML/MDS，在MDS中del(7q)預(yù)后中等；-7預(yù)后差。AML中-7預(yù)后差。

● EGR1/D5S23，-5/del(5q31)

常見于MDS、AML，在MDS中發(fā)生率占10-15%。MDS中del(5q)預(yù)后好，而在AML中-5/del(5q)預(yù)后差。

●CEP8，+8

常見于AML、MDS和CML急變時，AML/MDS中單獨+8時預(yù)后中等，CML患者病程中在t(9;22)易位的基礎(chǔ)上出現(xiàn)+8，往往提示疾病進入加速期或急變期，是疾病進展的高危因素。

●D20S108，20q12/del(20q12)

常見于MDS、MPN、AML等，在MDS患者中預(yù)后好，MPD中預(yù)后不受影響。

●GATA2,MECOM，inv(3)(q21.3q26.2)/t(3;3)(q21.3;q26.2)

主要見于AML、MDS，發(fā)生率約2-5%，預(yù)后極差。

●BCR-ABL1，t(9;22)(q34;q11)

見于CML、ALL、AML等，BCR-ABL1易位是CML的特征性異常，伴BCR-ABL1的急性白血病多預(yù)后差。伴BCR-ABL1易位者對TKIs治療有效。

●ETV6(TEL)-AML1，t(12;21)(p13;q22)

主要見于兒童B-ALL，發(fā)生率約25%，預(yù)后好。細胞遺傳學水平不易檢出此異常，需用FISH或PCR方法檢測。

●E2A分離探針，t(1;19)(q23;p13.3)/ t(17;19)(q22;p13.3)

主要見于B-ALL，t(1;19)是E2A常見的重排，出現(xiàn)在5%的B-ALL和20%的前B-ALL中，易侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，早期強化療能顯著改善療效；t(17;19)在所有ALL中占1%，預(yù)后差。

● iAMP21擴增

見于2%的B-ALL，是復(fù)發(fā)的高風險指標，常規(guī)治療效果差，早期發(fā)現(xiàn)，大劑量高強度化療能顯著改善療效。FISH是有效的檢測方法。

● CHIC2/D10Z1/D17Z1，+4/+10/+17

檢測B-ALL超二倍體染色體，在高超二倍體B-ALL中，當+4/+10/+17同時出現(xiàn)時，預(yù)后特別好。

● IGH分離探針，t(v;14q32)

見于B細胞腫瘤，包括B-ALL和B細胞淋巴瘤。IGH有多個易位伙伴基因，

IGH分離探針可檢測各種IGH易位。

●P16(CDKN2A)-D9Z3，9p21/del(9p21)

約10%兒童ALL可檢出del(9p21)，尤其在T-ALL中發(fā)生率高，伴del(9p21)者中約90%可檢測到P16基因丟失。

● MYC分離探針，t(v;8q24)

可檢測各種MYC基因的易位。BL中85%為t(8;14)(q24;q32)，10%為t(2;8)

(p11;q24)，5%為t(8;22)(q24;q11)；t(8;14)(q24;q32)還可見于DLBCL(5%-22%)、FL、DHL/THL；MYC異常在DLBCL、DHL/THL、FL中預(yù)后差。約2%的T-ALL中可見t(8;14)(q24;q11.2),對治療反應(yīng)差。

● MYC/CEP8-IGH三色探針

檢測t(8;14)(q24;q32)染色體易位及8號染色體數(shù)目異常。

● NUP214-ABL1

主要見于約6%的T-ALL，TKIs治療有效。

●TRA/D 14q11.2

約30%的兒童T-ALL中常常累及T細胞受體基因TCRA\TCRB\TCRG\TCRD的易位，TRA/D探針可檢測包括t(10;14)(q24;q11.2)、t(1;14)(p32;q11.2)t(11;14)

(p15;q11.2)、t(11;14)(p13;q11.2)等涉及14q11位點的各種TCRA/D易位。

● TLX3分離探針5q35

由于t(5;14)(q35;q32)易位而致TLX3表達失調(diào)，見于20%的兒童T-ALL和13%的成人T-ALL，t(5;14)(q35;q32)易位通常是隱匿性的，細胞遺傳學方法難以識別，用FISH方法可有效檢測。預(yù)后差。

● ATM/CEP11，CEP11/del(11q22)

ATM位于11q22，缺失常在CLL中出現(xiàn)，ATM缺失提示預(yù)后差，同時伴TP53突變時，預(yù)后更差。

● CEP12，12號著絲粒/12三體

12號染色體三體在CLL中多見，預(yù)后中等或差；在MCL中預(yù)后差。

●D13S319，13q14/del(13q14)

13q14缺失見于很多惡性血液腫瘤，包括CLL、MM、MCL、DLBCL等，在CLL中發(fā)生率約55%，預(yù)后好，在MM中發(fā)生率約16-40%，預(yù)后中等或差。

●CCND1-IGH，t(11;14)(q13;q32)

是MCL的標志性異常；MM中也常見，在MM中預(yù)后較好或中等。

●IGH-BCL2，t(14;18)(q32;q21)

見于FL、DLBCL等淋巴系統(tǒng)腫瘤；若同時有IGH-BCL2和MYC基因易位的Double-Hit或Triple-Hit淋巴瘤預(yù)后差。

●D6Z1-MYB，6q23/del(6q23)

CLL中約5%患者可見，預(yù)后不良。

● BCL6分離探針3q27

涉及BCL6基因(3q27)的易位，見于30%-35%的DLBCL和10-15%的FL淋巴瘤，在DLBCL中預(yù)后差。

● CEPX/CEPY，X/Y著絲粒

異性別造血干細胞移植后嵌合狀態(tài)檢測，實時，準確性高。

●TP53，del(17)(p13)

TP53是重要的抑癌基因，幾乎見于各種髓、淋系腫瘤，其丟失或突變在各種血液腫瘤中都是預(yù)后差的標志。

● MM常見相關(guān)基因的FISH檢測

◇CCND1-IGH，t(11;14)(q13;q32)

是MCL的標志性異常；MM中也常見，在MM中預(yù)后較好或中等。

◇ FGFR3-IGH，t(4;14)(p16;q32)

是MM特征性異常，預(yù)后差。至少85%的t(4;14)患者同時存在del(13q)。

◇ IGH-MAF，t(14;16)(q32;q23)

見于約5%的MM患者，易位后可導(dǎo)致MAF基因過表達，預(yù)后差。

◇1q21擴增/1p32丟失

是MM中常見異常之一，發(fā)生率約30-35%，與疾病的進展密切相關(guān)，伴此異常患者生存期短，預(yù)后差。硼替佐米等新藥治療不能克服其不良預(yù)后。

◇TP53，del(17)(p13)

在MM患者中約占10%。它的缺失導(dǎo)致患者對化療藥物不敏感，預(yù)后極差。

● 與嗜酸粒細胞增高相關(guān)基因的FISH檢測

◇ FGFR1 8p11

與FGFR1相關(guān)疾病中，常表現(xiàn)為淋巴瘤，特別是T-LBL伴嗜酸粒細胞增多，

CEL或AML。已鑒定出于FGFR1形成融合蛋白的伙伴基因有14種。

◇ PDGFRA 4q12

與PDGFRA相關(guān)疾病中，常表現(xiàn)為CEL伴有顯著肥大細胞系累及，或AML伴嗜酸粒細胞增多。常由于4q12隱匿性缺失形成FIPIL1-PDGFRA融合基因。

◇ PDGFRB分離探針

可檢測各種PDGFRB基因易位。PDGFRB融合基因見于MPN、MDS、AML、B-ALL、T-ALL等各種類型白血病，也是BCR-ABL1樣ALL中較常見的異常，通常TKIs治療有效。目前已報道的PDGFRB伙伴基因超過20種，常見的是ETV6(TEL)-PDGFRB。約8%Ph-like ALL存在EBF1-PDGFRB

融合基因。

◇PCM1-JAK2t(8;9)(p22;p24.1)

2016版WHO提出將髓系/淋系腫瘤伴t(8;9)(p22;p24.1)/PCM1-JAK2作為一個暫定的新的分類亞型。PCM1-JAK2融合基因陽性患者常呈現(xiàn)慢性髓系腫瘤特點，例如MPN或MDS/MPN，50%-70%有嗜酸性粒細胞增高和/或骨髓纖維化；較少伴發(fā)T-LBL或B-ALL；骨髓形態(tài)紅系增生明顯伴淋巴細胞聚集。JAK抑制劑治療效果欠佳，預(yù)后差，早期需考慮異基因造血干細胞移植?？捎肑AK2斷裂分離探針推測PCM1-JAK2融合基因的存在。

● BCR-ABL1樣B-ALL相關(guān)基因的FISH檢測

◇ ABL1基因

目前已報道ABL1除BCR外還有至少7個其它伙伴基因，次常見的為TEL-ABL1，而且大多用伊馬替尼等激酶抑制劑(TKIs)治療有效。用BCR-ABL1融合基因探針間接檢測任何涉及ABL1的易位。

◇ CRLF2分離探針

約50%BCR-ABL1樣B-ALL中存在CRLF2易位，常見CRLF2-IGH，CRLF2易位或突變的ALL多伴有JAK1/2或ABL1家族的激酶活化突變，JAK抑制劑治療有效。

◇ P2RY8丟失探針

P2RY8與CRLF2基因均位于Xp22或Yp11上，相距大約300kb，其間的擬常染色質(zhì)區(qū)微缺失致P2RY8基因增強子與CRLF2基因啟動子并置，導(dǎo)致CRLF2基因過表達。JAK抑制劑治療有效。

◇ PDGFRB分離探針

可檢測各種PDGFRB基因易位。PDGFRB融合基因見于MPN、MDS、AML、B-ALL、T-ALL等各種類型白血病，也是BCR-ABL1樣ALL中較常見的異常，通常TKIs治療有效。目前已報道的PDGFRB伙伴基因超過20種，常見的是ETV6(TEL)-PDGFRB。約8%Ph-likeALL存在EBF1-PDGFRB融合基因。

◇ JAK2分離探針

JAK2基因位于9q24，是細胞因子信號通路上的一種酪氨酸激酶，在MPN、BCR-ABL1樣ALL中都可見JAK2的突變和易位，常見的易位伙伴基因有：PCM1、BCR、ETV6、SSBP2和3q21；在BCR-ABL1樣ALL中已報導(dǎo)的易位伙伴基因有ATF7IP、BCR、EBF1、ETV6、PAX5、PPFIBP1、SSBP2、STRN3、TERF2、TPR，采用JAK2分離探針，均可有效檢測JAK2基因是否受累，無需考慮其伙伴基因。是JAK2抑制劑治療靶點。

● 神經(jīng)母細胞瘤相關(guān)基因的FISH檢測

◇ MYCN，MYCN擴增

神經(jīng)母細胞瘤特有的遺傳學改變，預(yù)后差。

◇ 1p36微缺失

1p36微缺失導(dǎo)致腫瘤抑制基因失活，多見于神經(jīng)母細胞瘤，預(yù)后不良。